Два метода отщепления пептидов от твердофазных смол

твердая фаза Fmoc После химического синтеза пептидов существует множество методов расщепления. Теперь мы представим два основных типа, которые обычно используются всеми.

Поместите сухую смолу в шейкерную колбу и добавьте необходимое количество поглотителя ( Поглотители ), расщепляющего реагента трифторуксусной кислоты ( TFA ), 10-25 мл/г смолы, накройте крышкой и периодически встряхивайте при комнатной температуре. Отфильтруйте смолу новым ТФУ. Промойте смолу 2-3 раза, объедините фильтрат и по каплям добавьте ледяного эфира в 8-10-кратном объеме. Иногда часть его можно отпарить от TFA. Получался сырой пептидный осадок. Диэтиловый эфир можно охладить льдом для повышения эффективности осаждения. Наконец, соберите выпавший в осадок сырой пептид.

Применимая смола:королевская смола или амидная смола Rink

1% ТЖК:

будет 1 г. Полипептидную-висящую смолу добавляли к раствору, содержащему 1% TFA. Стеклянную встряхиваемую колбу с раствором дихлорметана закрывали и встряхивали в течение 2 минут. Используйте азот, чтобы перелить фильтрат в другую новую колбу для встряхивания метанола, содержащую 10% пиридина. Повторите вышеописанную операцию 10 раз. Используйте 30 мл DCM, 30 мл MeOH. Промойте оставшиеся защищенные пептиды на смоле три раза последовательно. с помощью ТСХ или ВЭЖХ. Проверьте остатки очистки. Объедините весь фильтрат и выпарите растворитель при пониженном давлении, чтобы осталось 5% объема. добавьте 40 мл воды и охладите смесь-льдом, чтобы способствовать осаждению. После фильтрации трижды промойте продукт чистой водой и поместите в вакуумный сушильный бокс для использования. KOH или P2O5 Дать высохнуть.

разбавленная уксусная кислота:

используйте AcOH/TFE/DCM (2:2:6). Обработайте пептиды, висящие на смоле, раствором для резки в течение 2 часов, отфильтруйте смолу и трижды промойте смолу раствором для обработки. Добавьте к смешанному фильтрату 15-кратный объем н-гексана и выпарите на роторном испарителе, чтобы удалить избыток уксусной кислоты. Методы восстановления пептидов подробно описаны ниже.

Применимая смола:2- Смола CTC