Растворение полипептидов
Каждая аминокислота имеет присущие ей химические свойства, а растворимость пептида зависит от его последовательности и модификаций. Мы рекомендуем взять небольшое количество пептида для проверки растворимости, прежде чем растворять все пептиды.
Растворение пептидов – очень важный шаг. Неправильная солюбилизация может привести к потере пептида или неудаче эксперимента. Растворимость пептидов в основном зависит от последовательности пептида, поэтому обратите внимание при разработке пептида. Рекомендуется, чтобы пептидная последовательность содержала 20% заряженных остатков для повышения ее растворимости.
Перед использованием клиенты могут следовать следующим трем основным принципам, чтобы выбрать подходящий растворитель для растворения пептида.
Во-первых, выбранный растворитель должен быть способен полностью растворять пептид; Во-вторых, выбранный растворитель должен быть совместим с условиями эксперимента; Наконец, выбранный растворитель не должен реагировать с пептидом или разрушать его.
Если позволяет количество пептида, вы можете сначала растворить небольшую часть пептида, а затем растворить весь образец. Если вам необходимо восстановить пептид из растворителя, вы можете выбрать исходный растворитель, который позволит легко удалить его после лиофилизации.
Следующие предложения могут помочь вам растворить пептиды:
Пептиды, содержащие менее 5 аминокислот, обычно растворимы в водных растворах, за исключением сильно гидрофобных аминокислот (W, I, L, F, M, V, Y).
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25% Заряженные аминокислоты (E, D, K, R, H) гидрофильных пептидов и содержащие<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% Заряженные аминокислоты также могут быть нерастворимыми или частично растворимыми в воде. Лучше всего сначала растворить пептид в минимальном количестве сильного органического растворителя, такого как ДМФ, АЦН, изопропиловый спирт, этанол, уксусная кислота, 4-8 М GdnHCl, мочевина или ДМСО (не в последовательности C, W, M) и других подобных органических растворителях. Лучше всего медленно добавлять по каплям органический растворитель, растворяющий пептид, в водный раствор. Если раствор становится мутным, возможно, он достиг предела растворимости и продолжать растворять его бесполезно. Следует отметить, что первоначально выбранный растворитель должен быть совместим с экспериментальной системой.
Hydrophobic amino acid content >75% Сильно гидрофобные пептиды обычно нерастворимы в водных растворах. Такие пептиды также следует сначала обработать сильными органическими растворителями (например, ТФУ, муравьиной кислотой), которые растворяются и могут также осаждаться при добавлении в водный раствор. Для денатурации конечного раствора пептида могут потребоваться высокие концентрации органических растворителей, а органические растворители обычно не используются для исследований биологических функций в живых клетках.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) Полипептидные последовательности имеют тенденцию образовывать избыточные сети межмолекулярных водородных связей и легко образуют гели в концентрированных водных растворах. Такие пептиды можно солюбилизировать, как описано в шаге 3. Чтобы уменьшить возможные проблемы при растворении, клиентам рекомендуется уделять больше внимания конструкции и последовательности для улучшения растворимости пептида.